2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液,用于進一步制備RNA-LPX。
HEPES作為IVT反應體系buffer具有優(yōu)勢,這是我們結合相關文獻,推斷BioNTech采用HEPES緩沖對作為mRNA原液buffer的原因。
三、HEPES相較于其他緩沖體系較為突出的特點
1、pKa隨溫度變化非常小,buffer的pH值隨溫度漂移很小。
2、性質穩(wěn)定,HEPES不會與其他離子發(fā)生相互作用,一方面HEPES不會與其他離子發(fā)生絡合影響其他離子功能,另外一方面其他離子的存在不會影響HEPES的緩沖能力。
3、細胞培養(yǎng)基中pH的維持主要依靠培養(yǎng)基中的碳酸氫鹽和5%的CO2共同維持,當細胞處于開放環(huán)境時,CO2逸散會導致pH快速上升脫離生理pH范圍,而添加HEPES緩沖對的培養(yǎng)基則不存在這方面問題。
4、HEPES不易穿過生物膜,不干擾細胞內的生化反應。
四、使用HEPES緩沖體系時的注意事項
1、由于pai嗪基團的存在,當HEPES暴露于光線中時,會產生H2O2,這對培養(yǎng)的細胞或其它有生物活性的物體產生毒性,同時對氧化還原敏感的物質不宜共同使用,因此HEPES作為緩沖液的操作應盡量在避光條件下進行。
2、HEPES在生化領域常見的使用濃度為10-25mM,當濃度低于10mM時緩沖能力較弱,不能起到較好的緩沖效果,當濃度較高時對一些細胞可能具有毒害作用。
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